酶免分析步骤1. 实验须知1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃） ，时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存1.3 请不要改变分析程序1.4 请使用精确的微量移液器1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面2. 分析步骤2.1 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆） ，将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存2.3 样品稀释液（10×） 、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液2.7 在所有孔中加入50μl的抗*B1抗体酶结合物2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。3 .37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）3.1 甩掉孔中液体， 用洗液洗涤微孔板5次， *一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

4 .反应4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀4.2 37℃温浴10min4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。