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细胞溶酶体脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量检测试剂盒(HL50100.1)


cancer biomarkers guide
  • 产品名称:细胞溶酶体脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量检测试剂盒
  • 产品别称:
  • 货号:HL50100.1
  • 价格:20次/盒 价格请咨询客服

产品详情

产品用途定量检测细胞裂解样品中溶酶体酸性脂酶(LAL)活性。原理:底物胆固醇油酸酯经LAL水解产生游离脂肪酸,与醋酸铜反应生成蓝绿色产物,715nm处测定吸光度变化。


试剂组成清理液(A)120mL、裂解液(B)20mL、缓冲液(C)50mL、底物液(D)5mL、稀释液(E)50mL、显色液(F)10mL、专性液(G)1mL、标准液(H)1mL。

保存:4℃,有效期3个月。稀释液和标准液有毒性挥发性,注意密闭。


样品制备收集1-5×10⁷个细胞,清理液洗涤后加入裂解液1mL,冰浴DOUNCE匀浆20-40下。4℃先800g离心10分钟,取上清再10000g离心15分钟,弃上清。沉淀用缓冲液500μL重悬,蛋白定量后-70℃保存或冰浴待测。


标准曲线配制1号管:标准液400μL(2mmol/L) 2号管:稀释液200μL+1号管200μL(1mmol/L)
3号管:稀释液200μL+2号管200μL(0.5mmol/L) 4号管:稀释液200μL(0)

测定:900μL稀释液+100μL标准液+200μL显色液,涡旋60秒,1000g离心3分钟,取上层1mL于715nm读数。


样品测定

背景对照:缓冲液800μL+底物液100μL+稀释液100μL,37℃孵育30分钟。取100μL加稀释液1mL、显色液200μL,涡旋离心后测吸光度。

总活性:将背景对照中的稀释液换成待测样品(50μg蛋白),其余相同。

非特异活性:缓冲液750μL+底物液100μL+专性液50μL+样品100μL,其余相同。


计算

活性 =(油酸浓度×10×1)÷(0.1×30)÷蛋白浓度 = μmol/mg/min

特异活性 = 总活性 - 非特异活性

单位定义:37℃、pH5.0条件下,每分钟释放1μmol游离脂肪酸所需酶量。


注意事项操作时戴手套;样品须澄清;底物液粘稠可80℃加热;背景测定只需一次;样品读数需高于背景才有效。


产品中心 联系方式  
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地址: 国定东路275号8号楼
电话: 18217722762 
联系人: 徐晓 
邮件: halingbio@qq.com

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