肌动蛋白（actin）在所有真核细胞普遍表达，高度保留的蛋白，构成细胞骨架的主要元素之一。肌动蛋白有6个亚型，在心肌、骨骼肌、平滑肌以及非肌肉细胞的胞浆中表达，调节收缩潜力、控制细胞的结构和运动。其中4个亚型成为肌肉组织细胞的分化标志。α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）是平滑肌细胞分化的标志。主要在血管平滑肌细胞表达，受到激素和细胞繁殖的调节。肿瘤转化和动脉粥样硬化会引起α平滑肌肌动蛋白表达异常。使用抗α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体可以识别在各种组织，包括乳腺、唾液腺、汗腺、支气管腺体、平滑肌、血管平滑肌、子宫基质、前列腺基质（stroma）细胞、周细胞（pericyte）、软骨细胞等正常或肿瘤组织的平滑肌细胞或α平滑肌肌动蛋白及其各种分化，包括成肌纤维细胞（myofibroblast）、肌上皮细胞（myoepithelial）等。通过抗α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示α平滑肌肌动蛋白细胞为棕褐色。

产品内容

 脱蜡液（Reagent A）  150毫升

 补水液A（Reagent B）  50毫升

 补水液B（Reagent C）  50毫升

 补水液C（Reagent D）  50毫升

 补水液D（Reagent E）  50毫升

 清理液（Reagent F） 100毫升

 酶解液（Reagent G）  2毫升

 封阻液（Reagent H）  2毫升

 一抗液（Reagent I）  1毫升

 二抗液（Reagent J）  1毫升

 显色液A（Reagent K） 500微升

 显色液B（Reagent L）  5毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存 酶解液（Reagent G）、 一抗液（Reagent I）、 二抗液（Reagent J）和 显色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里； 二抗液（Reagent J）和 显色液A（Reagent K），避免光照；有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

特别注意

1． 显色液A（Reagent K）和 显色液B（Reagent L）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉

2． 显色液A（Reagent K）如果出现沉淀，须过滤后再用

3．石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则组织易脱落

实验步骤

一、脱蜡处理

1．取出10片待测的石蜡包埋的6微米厚组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）

2．按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸  孵育时间

50毫升 脱蜡液（Reagent A）  15分钟

50毫升 脱蜡液（Reagent A） 15分钟

50毫升 脱蜡液（Reagent A） 15分钟

50毫升 补水液A（Reagent B） 3分钟

50毫升 补水液B（Reagent C） 3分钟

50毫升 补水液C（Reagent D） 3分钟

50毫升 补水液D（Reagent E）  3分钟

3．小心移去切片上的 补水液D（Reagent E）

4．小心加上200微升 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

5．室温下孵育5分钟

6．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

二、 蛋白消解处理

1．小心加上200微升 酶解液（Reagent G），铺满整个切片样品表面

2．室温下孵育5分钟

3．小心移去切片上的 酶解液（Reagent G）

4．室温下，将切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育5分钟

5．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

6．小心加上200微升 封阻液（Reagent H），铺满整个切片样品表面

7．室温下孵育5分钟

8．小心移去切片上的 封阻液（Reagent H）

9．室温下，将切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育5分钟

10．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

三、免疫标记处理

1．小心加上100微升含有 一抗液（Reagent I），铺满整个切片样品表面

2．在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）

3．小心移去切片上的 一抗液（Reagent I）

4．室温下，小心将切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分钟

5．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

四、 样本染色处理

在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 显色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取200微升 显色液A（Reagent K）和1.8毫升 显色液B（Reagent L）到2毫升离心管，充分混匀，标记为 显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：

1．小心加上100微升 二抗液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）

2．室温下孵育30分钟，避免光照

3．小心移去切片上的 二抗液（Reagent J）

4．室温下，小心将切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中孵育2分钟

5．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

6．小心加上200微升含有 显色液A（Reagent K）和 显色液B（Reagent L）的 显色工作液，铺满整个切片样品表面

7．室温下孵育5至30分钟，或直至样本出现棕褐色

8．小心移去切片上含有 显色液A（Reagent K）和 显色液B（Reagent L）的 显色工作液

9．室温下，小心将切片置入50毫升 清理液（Reagent F）中浸泡5秒

10．小心移去切片上的 清理液（Reagent F）

11．（选择步骤）进行甲基绿复染（注意：建议使用 甲基绿复染试剂盒